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活力碘对柯萨奇A24型及脊髓灰质病毒的灭活效果观察

[  修改时间:2013-2-17 15:33:06  浏览次数:3134]
 

活力碘对柯萨奇A24型及脊髓灰质病毒的灭活效果观察

同济医科大学协和医院病毒研究室

活力碘(聚吡咯酮碘)为聚吡咯酮与碘的络合物,它是一种广谱消毒剂,国外已广泛应用于医药、食品及环境卫生等消毒,并有取代其它消毒剂的趋势。我们对武汉生产的活力碘消毒剂进行了实验观察,以了解它对肠道病毒的灭活效果,现将结果报告如下:

材料与方法

1、消毒剂:活力碘(聚吡咯酮碘)有效碘含量为0.9%9000PPM)。

2、病毒:脊髓灰质炎病毒(POL0Mahoneg株。武汉市防疫站赠。柯萨奇

A24型(Co×A24)新加坡EH24/70株,为沙市防疫站赠,与消毒剂作用的病毒液在人胚肺细胞上繁殖产生完全细胞病变所收获的细胞培养液。

3、细胞:人胚肺二倍细胞(本室自传第24代)。细胞培养于含1%小牛血清Eagie’s培养液中。

4、微量中和实验:方法参见文献1即将100JTCID50/0.1ml的病毒量加入剂不同稀释的消毒剂,作用不同时间后,采集样品,每个样品加入相应浓度的硫代硫酸钠中和剂,以终止反应,经处理的样品接种道96孔板人胚肺细胞上培养7天,观察是否出现细胞病变。若完全不出现细胞病变表示无病毒繁殖,病毒被灭活。

5ELISA夹的法:方法参见文献2

即将Co×A24鸡免疫血清已被40孔聚乙烯板,加经消毒剂灭活的Co×A24抗源。3711/2小时3×3ˊ→加含Co×A24抗体的人血清37C1小时→3×3ˊ洗→加羊抗人辣根过氧化物酶结合物37C1小时→洗→加底物37C15ˊ加终止剂→测OD值。

6ELISA阻断实验(中和实验),为证实ELISA法的可靠性特异性,帮进行阻断实验。即取Co×A24免疫血清与待检样品混均为和组,另取磷酸缓冲液加待检样品混均为实验组

2组分别取0.1ml加到已包被有Co×A24的微孔中,其余方法同ELISA法。

1、用微量中和法检测活力碘对Co×A24POLIOI型病毒灭活作用,由表可见31PPM

5分钟即可完全灭活100TCID50含量的Co×A24病毒。62PPm若加大Co×A24病毒量至100010000TCID50,则62PPm作用5分钟灭活效果微弱。但若将消毒剂浓度再加大10倍则有可能完全灭活更大剂量病毒,需作进一步观察。

2、为了近一步佐证活力碘的灭活效果,我们同时应用ELISA夹心法检测灭活Co×A24

毒的效果,由表2可见,含活力碘1.8PPm(即将原液稀释5000)2.5分钟即可灭活300TCID50Co×A24病毒。经阻断实验证明这种灭活作用是特异性的。若病毒溶液中含有其它有机物质是否影响消毒剂的效果呢?我们将病毒液中加入10%牛血清,结果表明存在有机物条件下1.8PPm活力碘则需5分钟可完全灭活病毒。

3、活力碘在不同PH条件下对病毒的灭活效果:(见表3)结果表明在PH567的情

下不影响其灭活效果。

4、活力碘的稳定性:

将活力碘稀释110后(含900PPm)储存417天测完全灭活病毒的作用,用ELISA

检测,若将活力碘用蒸馏水稀释(PH6—6.55000倍置于4储存3—5天不影响其灭活效

果,但若储存20天则完全失去灭活病毒的作用。

用微量中和法检测活力碘对Co×A24POLIOI型病毒灭活作用

有效碘浓度 抗原浓度

125PPm 100 TCID50

62PPm 100 TCID50

62PPm 1000 TCID50

62PPm 10000 TCID50

31PPm 100 TCID50

16PPm 100 TCID50

8PPm 100 TCID50

Co×A24灭活效果

POLIOI型灭活效果

5 10 15 20 30(min)

- - - - -

- - - - -

±(未 测)

(未 测)

- - - - -

++ ++ + ± ±

+++ +++ +++ +++ +++

2 5 10 15 20 30(min )

( )

- - - - - -

(未 测)

(未 测)

+++ +++ ++ ± - -

++++ ++++ ++++ ++++ ++++

(未 测)

病毒对照 100 TCID50

表示活力碘完全灭活病毒,+ - +++ 表示不同程度抑制病毒,++++表示完全不能灭活病毒,病毒仍大量繁殖。

在活力碘浓度高于250PPm时,则对人胚肺细胞有毒性,故最高浓度采用125PPm

用用ELISA法检测灭活Co×A24病毒的灭活效果

有效碘浓度 抗原浓度

1.8PPm 300 TCID50

3.6PPm 300 TCID50

使

2.5 5 10 20min

- - - -

++ + ± -

阳性抗原对照 300 TCID50 ++ ++ ++ ++

阳性抗原对照 细胞培养液 - - - -

1300稀释

1.8PPm 300 TCID50 + - - -

(含10%牛血清)

阳性抗原对照组 300 TCID50 +++ +++ +++

(含10%牛血清)

阳性抗原对照组(含10%牛血清) - - - -

表示Co×A24活性<2.1,(P/N)表示灭活作用。注本试剂盒P/N>表示试剂盒实验能成立

PH活力碘灭活病毒效果的影响(微量中和法)

有效碘浓度

62PPm

62PPm

病毒

Co×A24

100 TCID50

100 TCID50

PH

5 6 7

- - -

- - -

病毒对照

100 TCID50 +++ +++ +++

注:以上为消毒剂作用5分钟结果。

本实验证明活力碘是有很强的灭活肠道病毒的作用。若仅稀释10倍则其性能是稳定的,

可储存17天,但若稀释倍数过高则不宜保存,最好临用前根据不同的用途再进行适当的稀

释为佳。由于Co×A24是当前全国流行性结膜炎(红眼病)的病因,因此,活力碘是很有希

望的一种预防红眼病的消毒剂。总之,活力碘适一种广效且稳定性好的一种理想消毒剂。

参考文献

1、董继华等 病毒学杂志 1987 . 2. P20

2、王有森等 《消毒技术规范》 卫生部公布 1988

 
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